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Parasiten verwendet verschiedene Strategien um in ihrem Wirt zu überleben einschließlich der Sekretion von Proteinen, der exkretorischen/sekretorischen (ES) Produkte, die mit verschiedenen Zellen des Immunsystems interagieren. Die Analyse der Funktion dieser zahlreichen Immunmodulatoren ist ein wichtiger Teil der parasitären Immunbiologie. Heligmosomoides polygyrus, ein Modellorganismus der Maus, simuliert die Infektion von menschlichen Magen-Darmparasiten und wird in vitro für das Gewinnen von ES-Produkten, die als HES bezeichnet werden, kultiviert. Diese Arbeit identifiziert Immunzellentypen, die mit rekombinant exprimierten HES-Komponenten, verwandt mit dem Stichodactyla Helianthus (ShK) Toxin, interagieren. Es konnte gezeigt werden, dass eines der Kandidatenproteine, SXCL4, teilweise das Verhalten von HES bei der Interaktion mit Zelltypen in der Milz replizieren konnte. Besonders mit CD19+ Milzzellen sowie mit von Knochenmark differenzierten dendritischen Zellen. Darüber hinaus war dieses Protein in der Lage, CD25+ regulatorische T-Zellen in einer Milzzellenkultur zu induzieren, während HES dort die Differenzierung von FoxP3-T-Zellen bewirkte. Die Färbung der Darmgewebsschnitte der Maus mit polyklonalen Rattenseren, welche erfolgreich für SDP1 und SDP2 produziert werden konnten, führte aufgrund von Problemen mit Autofluoreszenz und zu hoher Antikörperkonzentration nicht zu klaren Ergebnissen. Weitere Experimente sind notwendig, um mögliche Zielzellen für diese Proteine zu identifizieren. SXCL4 bleibt ein wichtiger Kandidat für zusätzliche Experimente und anschließender Mutagenese, um herauszufinden welche Aminosäuren des ShK Motivs wichtig für die Interaktion mit den Immunzellen sind. Helminths utilize various strategies for the survival in their host involving the secretion of proteins, excretory/secretory (ES) products, that interact with different cells of the immune system. The study of the function of those numerous immunomodulators is an important part of the basics of parasitic immunobiology. Heligmosomoides polygyrus, a mouse model organism that simulates the infection of human gastrointestinal helminths, can be used for the in vitro collection of ES products termed HES. The goal of this work was to find interaction partners of recombinantly expressed members of the Stichodactyla helianthus (ShK) toxin related family that are found in HES. Binding assays showed that one of the candidate proteins (CPs) SXCL4 could replicate in part the behaviour of HES in interacting with splenic cells most prominently with a subset of CD19+ cells. as well as with bone marrow derived dendritic cells. Furthermore, this protein was able to induce CD25+ regulatory T cells in a splenic culture while HES facilitated the differentiation of Foxp3+ T cells. Staining of murine intestinal sections with polyclonal rat sera, successfully produced for the CPs SDP1 and SDP2, did not lead to clear results due to issues with autofluorescence and too high antibody concentration. Further experiments are necessary to identify potential targets for those proteins. SXCL4 remains a strong candidate for additional experiments and subsequent mutagenesis analysis to shed light on which amino acids of the ShK motif are important in the interaction with the target cells. Vorgelegt von: Yvonne Graf Molecular Biotechnology Wien, FH Campus Wien, Masterarb., 2018 |
