Uso de Nicotiana benthamiana para produção do fragmento scFvBap1, um anticorpo antagonista a metaloproteinases de serpentes do gênero Bothrops
| Autor: | Gomes, Marinna |
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| Přispěvatelé: | Santos, Marcelo de Oliveira, Alvarez, María Alejandra, Gameiro, Jacy, Quellis, Leonardo Ramos |
| Jazyk: | portugalština |
| Rok vydání: | 2018 |
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| Zdroj: | Repositório Institucional da UFJF Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF) instacron:UFJF |
| Popis: | Acidentes ofídicos representam um grave problema de saúde pública devido a sua alta incidência e a gravidade dos seus efeitos. No Brasil, o gênero Bothrops é responsável por 85% dos casos de acidentes. A principal forma de tratamento para tais acidentes é feita através da soroterapia, utilizando-se anticorpos eqüinos, porém os mesmos não são capazes de neutralizar os efeitos sistêmicos do envenenamento e podem causar reações adversas. Uma nova perspectiva para o tratamento de acidentes ofídicos é a utilização de anticorpos recombinantes, mais precisamente a porção scFv. O fragmento scFvBap1 é oriundo de um anticorpo monoclonal, produzido em Escherichia coli foi capaz de neutralizar os efeitos hemorrágicos do envenenamento. Atualmente as plantas vêm sendo amplamente utilizadas na produção de proteínas recombinantes de interesse farmacêutico. Neste estudo, objetivou-se a expressão do fragmento scFv em Nicotiana benthamiana, a fim de avaliar seu potencial para ser utilizado como soro antiofídico. Foram avaliadas a expressão transiente do fragmento scFvBap1 em folhas de N. benthamiana, bem como a expressão estável na mesma planta. Os fragmentos produzidos foram capazes de reconhecer e neutralizar as toxinas BaP1 de B. asper, BnP1 de B. newidae e ATX de B. atrox, demonstrando seu potencial para ser utilizado na terapia contra envenenamentos ofídicos. O sistema de produção estável apresentou-se maior rendimento de proteínas (270 μg/g) quando comparado ao sistema de produção transiente (43 μg/g). Por fim, o sistema mostrou-se uma ótima alternativa para produção do fragmento de anticorpo quando comparado ao sistema bacteriano. Ophidian accidents are a global health problem due to its high incidence and gravity of its effects. In Brazil, the genus Bothrops is responsible for 85% of the cases of accidents. The main form of treatment for snake envenoming is serum therapy using equine antibodies, however, they are not able to neutralize the local effects of the toxin and may also cause adverse reactions. A new perspective for the treatment of snakebite envenoming has emerged with the use of recombinant antibodies, particularly the Fv fragment (scFv). The scFvBap1, is an efficient antibody capable of neutralizing the hemorrhagic effects and proteolytic activity caused by metalloproteinases. Currently the plants have been widely used in the production of recombinant proteins of pharmaceutical interest. In this study, we aimed the expression of the scFv fragment in Nicotiana benthamiana, in order to evaluate its potential as an antiophiidic serum. The transient expression of the scFvBap1 fragment in leaves of N. benthamiana, as well as the stable expression in the same plant, were evaluated.The fragments produced were able to recognize and neutralize the toxins BaP1 from B. asper, BnP1 from B. newidae and ATX from B. atrox, demonstrating their potential to be used in therapy against ophidian poisoning. The stable production system presented higher protein yield (270 μg / g) when compared to the transient production system (43 μg / g). Finally, the system proved to be a good alternative for producing the antibody fragment when compared to the bacterial system. |
| Databáze: | OpenAIRE |
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