Expressão diferencial do gene PBRM1 e sua qualificação clínica em tumores de próstata

Autor: Mota, Sara Teixeira Soares
Přispěvatelé: Vecchi, Lara, Araújo, Thaise Gonçalves de, Lacerda, Elisângela de Paula Silveira, Maia, Yara Cristina de Paiva
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2017
Předmět:
Zdroj: Repositório Institucional da UFU
Universidade Federal de Uberlândia (UFU)
instacron:UFU
Popis: CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico O Câncer de Próstata (CaP) é o sexto tipo de câncer mais comum e mais dominante na população masculina e a segunda maior causa de morte, após o câncer de pulmão. Diversos mecanismos encontram-se envolvidos no surgimento e progressão do CaP, sobretudo aqueles que regulam a expressão de diferentes genes. A proteína Polibromo-1 (PBMR1/BAF180) é a uma das subunidades que dão especificidade ao complexo de remodelagem da cromatina SWI/SNFB (PBAF) e mutações dentro dos domínios de PBRM1 são descritas em diversos tipos de cânceres. Porém, seu papel no CaP ainda não foi descrito. Por meio de qPCR avaliamos os níveis transcricionais dos domínios do gene PBRM1 no tecido e sangue periférico de pacientes com CaP e hiperplasia prostática benigna (HBP) e em quatro linhagens celulares, incluindo uma não neoplásica (RWPE), uma hormônio responsiva (LNCaP) e duas hormônio refratárias (PC3 e DU145). Em seguida experimentos de imunohistoquímica foram realizados para avaliar o comportamento da proteína PBRM1 em pacientes com CaP. Ensaios de Western Blotting e imunoflorescência confirmaram o perfil da proteína nos compartimentos celulares. Os domínios do gene PBRM1 se apresentaram diferencialmente expressos no CaP e HPB e nas linhagens prostáticas. O BRD1 (Bromodomínio 1) foi capaz distinguir pacientes com câncer daqueles com a doença benigna, além de correlacionar com TNM. A proteína foi encontrada no núcleo, citoplasma e membrana de pacientes com CaP. Sua expressão mais elevada no núcleo foi significativamente maior quando o PSA foi ≥ 10ng/mL e em pacientes com maior grau de Gleason. Nas linhagens celulares, PBRM1 também foi encontrada em diferentes compartimentos e tamanhos, sendo que na RWPE a proteína apresentou-se completa e no núcleo, em LNCaP também completa, mas no citoplasma. Já nas PC3 e DU145, foi localizada nos dois compartimentos de forma truncada. PBRM1 pode estar envolvido no desenvolvimento e progressão de tumores prostáticos, regulando diferentes eventos associados à biologia tumoral. Dado seu papel na modificação da cromatina, a definição dos mecanismos envolvidos em seu comportamento pode levar a novas estratégias de tratamento do CaP. Sendo assim, nossos resultados fornecem uma base para um estudo genético molecular biologicamente significativo e clinicamente relevante. Vale ressaltar que não se trata apenas de um estudo visando à identificação de biomarcadores, mas, sobretudo, evidencia eventos chaves na compreensão molecular do CaP. Palavras-chave: Câncer de próstata, PBRM1, expressão diferencial, AR, remodelagem da cromatina. Prostate cancer (PCa) is the sixth most common and most dominant cancer in the male population and the second largest cause of death after lung cancer. Defined as heterogeneous tumor, several mechanisms are involved with its onset and progression, especially those that alter the expression of different genes. Polybromo-1 (PBRM1/BAF180) protein is one of the subunits that gives specificity to the SWI / SNF chromatin remodeling complex and mutations within the PBRM1 domains are described in several types of cancers. However, its role in PCa has not been described yet. Using qPCR we evaluated the transcriptional levels of PBRM1 domains in the peripheral blood and tissue of patients with PCa and benign prostatic hyperplasia (BPH) and also in four cell lines, including a non-neoplastic (RWPE), a hormone responsive (LNCaP) and two hormones refractory (PC3 and DU145). Subsequently immunohistochemistry experiments were performed to evaluate the behavior of PBRM1 protein in patients with PCa. Western blotting and immunofluorescence assays confirmed and validated the protein expression profile in the cell compartments. PBRM1 domains were differentially expressed in PCa and BPH and in prostatic lines. BRD1 was able to distinguish cancer patients from those with benign disease, besides correlating with TNM. The protein was found in the nucleus, cytoplasm and membrane of patients with PCa. Higher expression in the nucleus was significantly when the PSA was ≥ 10ng / mL and in patients with a higher degree of Gleason as well. In the cell lines, PBRM1 was also found in different compartments and sizes. In RWPE the protein was full-length and in the nucleus, in LNCaP also full-lenght, but in the cytoplasm. In PC3 and DU145, it was located in the two compartments in a truncated form. PBRM1 may be involved in the development and progression of prostatic tumors, regulating different events associated with tumor biology. Given its role in modulating chromatin, defining mechanisms involved in its behavior may lead to new strategies for the treatment of PCa. Therefore, our results provide a basis for biologically significant and clinically relevant molecular genetic study. It is worth highlighting this is not only a study that aims the identification of biomarkers, but, mainly, it shows key events in the molecular understanding of PCa. Keywords: Prostate Cancer, PBRM1, differential expression, AR, remodeling complex Dissertação (Mestrado)
Databáze: OpenAIRE
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