Desempenho das proteínas recombinantes rKLO8, rLb6H, rK28, rK39, 39r2 e 39r4 no diagnóstico sorológico da leishmaniose visceral canina: relação com apresentações clínicas da doença e vacinação

Autor: Pereira, Ingrid Estevam
Přispěvatelé: Teixeira, Henrique Couto, Oliveira, Erick Esteves de, Silva Neto, Adolfo Firmino da, Coimbra, Elaine Soares, Porrozzi, Renato, Silva, João Santana da
Jazyk: portugalština
Rok vydání: 2021
Předmět:
Zdroj: Repositório Institucional da UFJF
Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)
instacron:UFJF
Popis: CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A leishmaniose visceral (LV), zoonose de transmissão vetorial, é um dos principais problemas de saúde pública no Brasil e outros países tropicais e subtropicais, tendo o cão como importante elemento no ciclo de transmissão. A detecção da infecção nesses animais é parte fundamental no monitoramento da doença. Entretanto, o diagnóstico da LV canina (LVC) é dificultado pela ampla variabilidade clínica e longo período de incubação. No intuito de elevar a acurácia do diagnóstico sorológico da LVC, diversos antígenos recombinantes de Leishmania sp têm sido desenvolvidos e estudados. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o desempenho diagnóstico das proteínas recombinantes rKLO8, rLb6H, 39r2 e 39r4 no diagnóstico da LVC, comparados aos antígenos de referência, rK28 e rK39. Primeiramente, os antígenos rK28, rKLO8, rLb6H e rK39 foram avaliados por IgG-ELISA quanto a sua capacidade de detectar e diferenciar cães positivos para TR-DPP® e EIE L.major-like® (grupo CVL), controles negativos de área endêmica (negativos para o teste TR-DPP® - grupo CE), ambos provenientes da cidade de Governador Valadares (MG) e cães que foram imunizados contra LVC (Leish-Tec® - grupo VAC), provenientes da cidade de Belo Horizonte (MG). A reatividade de IgG contra os antígenos rK28, rKLO8, rK39 e rLb6H foi elevada nos soros do grupo LVC, com o maior valor de sensibilidade obtido com rK28 (84%), seguido por rK39 (82%), rKLO8 (75-77%) e rLb6H (52-57%). Os antígenos rK28 e rKLO8 foram mais específicos (95-100% e 93-100%, respectivamente), seguidos de rK39 (86-95%) e rLb6H (95%). Além disso, para todos os antígenos houve reatividade com soro de cães vacinados, embora em números variáveis, sendo maior para rLb6H (25%), seguido por rKLO8 e rK39 (13%) e menor (4,5%) para o antígeno de referência, rK28. Em seguida, os antígenos acima citados, e outras duas novas proteínas recombinantes com 2 ou 4 cópias da repetição de 39 aminoácidos (39r2 e 39r4), foram estudadas utilizando amostras de soro de cães negativos para o teste RIFI (grupo SAE) e cães com infecção por Leishmania confirmada parasitologicamente, assintomáticos (AD), oligossintomáticos (OD) e sintomáticos (SD), provenientes de Belo Horizonte (MG). A reatividade de anticorpos IgG e IgG2 foi maior em todos os grupos clínicos, em comparação ao grupo negativo, para todos os antígenos. Embora IgG1 se apresente elevado (p< 0,05) somente no grupo sintomático para os antígenos rK28, 39r2, 39r4 e rK39, níveis séricos de IgG, IgG1 e IgG2 se correlacionaram com o status clínico para todos os antígenos. Adicionalmente, nossos resultados mostram que rLb6H e rKLO8 se destacaram na detecção de cães assintomáticos (100% e 81,81%, respectivamente), com valores maiores de sensibilidade para rK28 e rLb6H (91,43%), seguidos por rKLO8 (85,71%), 39r2 e 39r4 (ambos, 80%). Em relação ao antígeno rK39, os valores de sensibilidade foram similares nas duas etapas experimentais (82% e 82,86%, respectivamente). Curiosamente, os cães sintomáticos com a maior reatividade de IgG para rK28 tiveram baixa reatividade para rLb6H. Em relação a especificidade, o valor máximo (100%) foi detectado para rK28, 39r2, 39r4 e rK39, provenientes de sequências homólogas entre L. infantum e L. donovani, seguidos por rKLO8 (85,71%) e rLb6H (71,43%). Os resultados mostram características importantes dos antígenos rKLO8, rLb6H, 39r2 e 39r4 para o diagnóstico da LVC, por apresentarem desempenho elevado e comparável aos antígenos de referência rK28 e rK39, permitindo ainda, o aprimoramento da detecção da LVC nos grupos de maior dificuldade diagnóstica (assintomáticos e oligossintomáticos). A lei Visceral leishmaniasis (VL), a vector-borne zoonosis, is one of the major public health problems in Brazil and other tropical and subtropical countries. Since dogs represent an important element in transmission cycle, detection of infected dogs is an essential part of monitoring the disease. However, canine VL diagnosis (CVL) is hampered by the wide clinical variability and long incubation period. In order to increase the accuracy of CVL serological diagnosis, several recombinant Leishmania sp antigens have been developed and studied. The present study aimed to evaluate the diagnostic performance of rKLO8, rLb6H, 39r2 and 39r4 recombinant proteins in CVL diagnosis, compared to the reference antigens, rK28 and rK39. First, rK28, rKLO8, rLb6H and rK39 antigens were evaluated by IgG-ELISA for their ability to detect and differentiate TR-DPP® and EIE L.major-like® positive dogs (CVL group), TR-DPP® negative dogs (endemic control - CE group), both from Governador Valadares city (MG) and anti CVL vaccinated dogs (Leish-Tec® - VAC group), from Belo Horizonte city (MG). IgG reactivity against rK28, rKLO8, rK39 and rLb6H antigens was higher in sera from CVL group, with the highest sensitivity value obtained by rK28 (84%), followed by rK39 (82%), rKLO8 (75-77%) and rLb6H (52-57%). The most specific antigens were rK28 and rKLO8 (95-100% and 93- 100%, respectively), followed by rK39 (86-95%) and rLb6H (95%). In addition, vaccinated dogs sera reacted to all antigens, although in variable numbers, being higher for rLb6H (25%), followed by rKLO8 and rK39 (13%) and lower (4.5%) for the reference antigen, rK28. Then, the aforementioned antigens, and two other new recombinant proteins with 2 or 4 copies of the 39 amino acid repeat (39r2 and 39r4), were studied using serum samples from RIFI-negative dogs (SAE group) and dogs with parasitological confirmed Leishmania infection, asymptomatic (AD), oligosymptomatic (OD) and symptomatic (SD), from Belo Horizonte (MG). For all antigens, IgG and IgG2 antibody reactivity was higher in all clinical groups compared to the negative group. Although IgG1 was elevated (p
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