A novel mutation in intron 11 donor splice site, responsible of a rare genotype in thyroglobulin gene by altering the pre-mRNA splincing process: Cell expression and bioinformatic analysis
Autor: | Maricel F. Molina, Mauricio Gomes Pio, Carina M. Rivolta, Ana Chiesa, Sofia Siffo, Héctor M. Targovnik |
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Jazyk: | angličtina |
Rok vydání: | 2021 |
Předmět: |
Male
0301 basic medicine Genotype RNA Splicing medicine.medical_treatment Clone (cell biology) 030209 endocrinology & metabolism Gene mutation Biology medicine.disease_cause Compound heterozygosity Thyroglobulin Biochemistry SPLICING SITE MUTATION 03 medical and health sciences 0302 clinical medicine Endocrinology Thyroid dyshormonogenesis purl.org/becyt/ford/3.2 [https] RNA Precursors medicine Humans Molecular Biology Gene MUTATION Mutation Base Sequence Infant Newborn Computational Biology medicine.disease Molecular biology Introns CONGENITAL HYPOTHYROIDISM Congenital hypothyroidism COMPOUND HETEROZYGOUS MUTATIONS HEK293 Cells 030104 developmental biology THYROGLOBULIN GENE Mutant Proteins purl.org/becyt/ford/3 [https] RNA Splice Sites HeLa Cells |
Zdroj: | CONICET Digital (CONICET) Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas instacron:CONICET |
Popis: | Thyroglobulin (TG) is a homodimeric glycoprotein synthesized by the thyroid gland. To date, two hundred twenty-seven variations of the TG gene have been identified in humans. Thyroid dyshormonogenesis due to TG gene mutations have an estimated incidence of approximately 1 in 100,000 newborns. The clinical spectrum ranges from euthyroid to mild or severe hypothyroidism. The purpose of the present study was to identify and characterize new variants in the TG gene. We report an Argentine patient with congenital hypothyroidism, enlarged thyroid gland and low levels of serum TG. Sequencing of DNA, expression of chimeric minigenes as well as bioinformatics analysis were performed. DNA sequencing identified the presence of compound heterozygous mutations in the TG gene: the maternal mutation consists of a c.3001+5G > A, whereas the paternal mutation consists of p.Arg296*. Minigen analysis of the variant c.3001+5A performed in HeLa, CV1 and Hek293T cell lines, showed a total lack of transcript expression. So, in order to validate that the loss of expression was caused by such variation, site-directed mutagenesis was performed on the mutated clone, which previously had a pSPL3 vector change, to give rise to a wild-type clone c.3001+5G, endorsing that the mutation c.3001+5G > A is the cause of the total lack of expression. In conclusion, we demonstrate that the c.3001+5G > A mutation causes a rare genotype, altering the splicing of the pre-mRNA. This work contributes to elucidating the molecular bases of TG defects associated with congenital hypothyroidism and expands our knowledge in relation to the pathologic roles of the position 5 in the donor splice site. Fil: Gomes Pio, Mauricio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; Argentina Fil: Molina, Maricel Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; Argentina Fil: Siffo, Sofía. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentina Fil: Chiesa, Ana Elena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; Argentina Fil: Rivolta, Carina Marcela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; Argentina Fil: Targovnik, Hector Manuel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; Argentina |
Databáze: | OpenAIRE |
Externí odkaz: |