Perfil de expressão plasmática dos microRNAs miR-200c e miR-210 em pacientes portadores de diferenças do desenvolvimento sexual (DDS) 46,XY de causa indeterminada

Autor: Felipe Martins Elias
Přispěvatelé: Sorahia Domenice, Madson Queiroz de Almeida, Gil Guerra Júnior, Leopoldo Alves Ribeiro Filho
Rok vydání: 2021
Zdroj: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
Universidade de São Paulo (USP)
instacron:USP
DOI: 10.11606/d.5.2020.tde-22072021-142734
Popis: Introdução: As diferenças do desenvolvimento sexual (DDS) afetam 1:1000-4500 nascidos vivos e são definidos como alterações nas quais o desenvolvimento cromossômico, gonadal ou genital são atípicos. Os pacientes portadores de DDS 46,XY apresentam um amplo espectro fenotípico e muitos apresentam genitália atípica ao nascimento. A avaliação diagnóstica de um paciente portador de DDS inclui dosagens hormonais, estudos radiológicos, citogenéticos e moleculares. Porém, uma porcentagem significativa de pacientes permanece sem etiologia e são classificados como DDS de causa indeterminada. Este fato sugere que mecanismos epigenéticos, i.e., não restritos ao DNA e, portanto, não contemplados por análises moleculares usuais, como sequenciamento tipo Sanger e Exoma, possam desempenhar um papel no seu desenvolvimento. Objetivos: Para melhor avaliar estes casos sem diagnóstico estabelecido, investigou-se neste projeto o perfil de expressão plasmático de microRNAs (miRNAs), pequenos RNAs não codificantes de proteína, que se ligam por complementariedade a região 3 ?UTR de mRNA alvos, bloqueando a síntese proteica. Metodologia: Após análise in silico e da literatura os miRNAs, miR-200c, miR-210, e referências miR-23a e miR-451 foram selecionados. O RNA foi extraído do plasma de pacientes e controles, após análise de hemólise por absorbância em 414nm, com o kit MagMAX mirVana Total RNA (Thermofisher), a reação de RT-qPCR foi realizada com os kits TaqMan Advanced miRNA cDNA e Advanced miRNA Assay (Thermofisher). Os dados foram analisados por ?Ct e 2-??Ct. Pacientes e controles foram divididos em dois grupos, pré-púberes (de acordo com volume testicular 5). Para análise de expressão por faixa etária os controles foram agrupados da seguinte maneira: 1-12 anos, 13-20 anos, 21-30 anos, 31-40 anos e 41-55 anos. Resultados: A expressão plasmática de miR-200c foi maior nos grupos de 13-20 a 41-55 anos do que no grupo de 1-12 anos (ANOVA p=0.0067). Adicionalmente, todos os grupos com mais de 13 anos tiveram médias individualmente maiores de miR-200c do que o grupo de 1-12 anos (p5). For age expression analysis controls were grouped as follows: 1- 12 years, 13-20 years, 21-30 years, 31-40 years and 41-55 years. Results: Plasma expression of miR-200c was higher in the groups aged 13-20 to 41-55 years than in the group aged 1-12 (ANOVA p=0.0067). In addition, all groups over the age of 13 had individually higher averages of miR-200c than the group aged 1-12 (p
Databáze: OpenAIRE
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