Développement d’un modèle de culture cellulaire 3D d’une lignée d’adénocarcinome mammaire triple-négatif impliquant une matrice extracellulaire de type trisomie 21

Autor: My-Anne Hong, P. Vago, Patricia Combes, Céline Pebrel-Richard, Laetitia Gouas, C. Goumy, Mahchid Bamdad, Clémence Dubois, Eleonore Eymard-Pierre, Gaëlle Salaün, Antoine Goisnard
Rok vydání: 2019
Předmět:
Zdroj: Morphologie. 103:76-77
ISSN: 1286-0115
DOI: 10.1016/j.morpho.2019.10.038
Popis: Introduction/objectif Devant la faible incidence du cancer du sein chez les patientes trisomiques 21 (T21), un role protecteur de la matrice extracellulaire T21 (MEC-T21) a ete avance. Nos travaux montrent que l’interaction in vitro de cellules d’adenocarcinome mammaire triple-negatif (TNBC) sur une MEC-T21 entraine la deregulation de genes impliques dans la transition epithelio-mesenchymateuse (TEM). Afin de mieux comprendre la regulation de la TEM par les interactions cellule–MEC-T21, nous travaillons a etablir un modele de culture tridimensionnelle (3D) a partir d’une lignee TNBC. Materiels/methodes La production de MEC in vitro a ete realisee a partir de fibroblastes ensemences a 40 000 cellules/cm2. Apres 8 jours de culture, la MEC a ete recuperee par collecte mecanique ou enzymatique (Trypsine-EDTA a 50 μg/mL), suivie ou non par une precipitation (acetone, NaCl) avant dosage proteique (BCA). La culture 3D a partir de MDA-MB-468 a ete realisee par la methode du Liquid Overlay Technique en presence de Geltrex® (Gibco) dans une microplaque « ultra-low-attachment » (Corning® Costar®) (200 a 10 000 cellules/puits, 0 % a 3 % Geltrex®). La morphologie et le diametre des structures cellulaires 3D ont ete suivis de j1 (24 h apres ensemencement) a j14 et la viabilite cellulaire a ete evaluee a j7 et j14 (Live/Dead®, Molecular Probes™). Resultats La quantite de proteines matricielles produites in vitro etait trop faible pour etre utilisee en culture 3D (100–200 μg/mL). Nos resultats montrent que 2000 ou 5000 cellules ensemencees dans 2,5 % ou 3 % de Geltrex® permettent d’obtenir un spheroide qui augmente de diametre entre j1 et j3. Apres j3, les spheroides perdent leur bordure lisse et a j14 un cœur necrotique est observe. Conclusions Les cellules MDA-MB 468 s’organisent en spheroide proliferatif au contact d’un environnement matriciel (Geltrex®). Le protocole actuel de production de MEC in vitro doit etre optimise afin de produire suffisamment de proteines pouvant permettre la formation d’un spheroide en culture 3D.
Databáze: OpenAIRE
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