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Thema der vorliegenden Arbeit war die Entwicklung von effizienten Strategien sowie neuen, wirkungsvollen Werkzeugen für die Gerichtete Evolution von Enzymen. Die Etablierung neuer Mutagenesestrategien und deren Anwendung sowie die Ausarbeitung neuer, leistungsfähiger Methoden wurden am Beispiel der Gerichteten Evolution der Bacillus subtilis Lipasen A und B erfolgreich durchgeführt. Neben der Durchführung einer kompletten Sättigungsmutagenese wurde auch eine neue Mutagenesemethode namens Assembly of Designed Oligonucleotides (ADO) entwickelt und angewendet. Die Entwicklung von effizienten Hochdurchsatzscreening-Systemen zur Verfolgung enantioselektiver Transformationen war ein weiterer Schwerpunkt der Arbeit. Neben der Entwicklung eines achtfach-parallelen ESI-MS Assays wurde erstmals die NMR-Spektroskopie in einem Hochdurchsatz-Assay auf Enantioselektivität genutzt. Mittels Chemical Shift Imaging konnte dieser Ansatz auf einen Durchsatz von 30 000 Proben pro Tag optimiert werden. |
