Rapid detection of Mycobacterium tuberculosis DNA and genetic markers for Isoniazid resistance in Ziehl-Neelsen stained slides.

Autor:	Bello GL; Universidade Luterana do Brasil, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular Aplicada à Saúde, Canoas, RS, Brasil., Morais FCL; Universidade Luterana do Brasil, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular Aplicada à Saúde, Canoas, RS, Brasil., de Jesus SP; Universidade Luterana do Brasil, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular Aplicada à Saúde, Canoas, RS, Brasil., Wolf JM; Universidade Luterana do Brasil, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular Aplicada à Saúde, Canoas, RS, Brasil., Gehlen M; Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Programa de Pós-Graduação em Pneumologia, Porto Alegre, RS, Brasil., de Almeida IN; Universidade Federal de Minas Gerais, Faculdade de Medicina, Laboratório de Pesquisa em Micobactérias, Belo Horizonte, MG, Brasil., Figueiredo LJA; Universidade Federal de Minas Gerais, Faculdade de Medicina, Laboratório de Pesquisa em Micobactérias, Belo Horizonte, MG, Brasil., Soares TDS; Universidade Luterana do Brasil, Graduação em Biomedicina, Canoas, RS, Brasil., Barcellos RB; Secretaria do Estado do Rio Grande do Sul, Centro de Desenvolvimento Científico e Tecnológico, Porto Alegre, RS, Brasil.; Universidade Federal do Rio de Janeiro, Programa de Pós-Graduação em Clínica Médica, Rio de Janeiro, RJ, Brasil., Dalla Costa ER; Universidade Federal do Rio de Janeiro, Programa de Pós-Graduação em Clínica Médica, Rio de Janeiro, RJ, Brasil.; AstraZeneca do Brasil, Cotia, SP, Brasil., de Miranda SS; Universidade Federal de Minas Gerais, Faculdade de Medicina, Laboratório de Pesquisa em Micobactérias, Belo Horizonte, MG, Brasil., Rossetti MLR; Universidade Luterana do Brasil, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular Aplicada à Saúde, Canoas, RS, Brasil.; Universidade Luterana do Brasil, Graduação em Biomedicina, Canoas, RS, Brasil.; Secretaria do Estado do Rio Grande do Sul, Centro de Desenvolvimento Científico e Tecnológico, Porto Alegre, RS, Brasil.; Universidade Federal do Rio de Janeiro, Programa de Pós-Graduação em Clínica Médica, Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Jazyk:	angličtina
Zdroj:	Memorias do Instituto Oswaldo Cruz [Mem Inst Oswaldo Cruz] 2020 Apr 17; Vol. 115, pp. e190407. Date of Electronic Publication: 2020 Apr 17 (Print Publication: 2020).
DOI:	10.1590/0074-02760190407
Abstrakt:	Background: Early diagnosis of tuberculosis (TB) and identification of strains of Mycobacterium tuberculosis resistant to anti-TB drugs are considered the main factors for disease control. Objectives: To standardise a real-time polymerase chain reaction (qPCR) assay technique and apply it to identify mutations involved in M. tuberculosis resistance to Isoniazid (INH) directly in Ziehl-Neelsen (ZN) stained slides. Methods: Were analysed 55 independent DNA samples extracted from clinical isolates of M. tuberculosis by sequencing. For application in TB diagnosis resistance, 59 ZN-stained slides were used. The sensitivity, specificity and Kappa index, with a 95% confidence interval (CI95%), were determined. Findings: The agreement between the tests was, for the katG target, the Kappa index of 0.89 (CI95%: 0.7-1.0). The sensitivity and specificity were 97.6% (CI95%: 87.7-99.9) and 91.7% (CI95%: 61.5-99.5), respectively. For inhA, the Kappa index was 0.92 (CI95%: 0.8-1.0), the sensitivity and specificity were 94.4% (CI95%: 72.7-99.8) and 97.3% (CI95%: 85.8-99.9), respectively. The use of ZN-stained slides for drug-resistant TB detection showed significant results when compared to other standard tests for drug resistance. Main Conclusions: qPCR genotyping proved to be an efficient method to detect genes that confer M. tuberculosis resistance to INH. Thus, qPCR genotyping may be an alternative instead of sequencing.
Databáze:	MEDLINE
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